DHRS4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411534-ACT

DHRS4 codifica a desidrogenase/redutase 4, um membro citosólico da família das desidrogenases/redutases de cadeia curta (SDR) que catalisa reações redox dependentes de NAD(P)(H) em substratos carbonílicos endógenos. Ao regular a interconversão de aldeídos e cetonas nos seus álcoois correspondentes, a DHRS4 contribui para a capacidade celular de desintoxicação e para a homeostase redox, processos que se cruzam com respostas ao stresse oxidativo e com a adaptação metabólica. A atividade da DHRS4 tem sido associada a vias que regulam o metabolismo relacionado com retinoides e, de forma mais ampla, o processamento de lípidos e xenobióticos, que influenciam a diferenciação e a sinalização de stresse. Alterações na expressão de DHRS4 foram observadas em conjuntos de dados associados a cancro e metabolismo, sustentando o seu uso como um nó funcional para estudar fenótipos controlados por redox, sem implicar desfechos clínicos.

DHRS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DHRS4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DHRS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DHRS4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DHRS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DHRS4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DHRS4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DHRS4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DHRS4 em células tumorais com expressão de DHRS4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.