Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dhh: sc-403357-ACT

Le gène humain **DHH** code **Desert hedgehog (Dhh)**, un morphogène sécrété de la famille Hedgehog qui régule la spécification du destin cellulaire et l’organisation des tissus via la signalisation canonique **PTCH1–SMO** et les facteurs de transcription **GLI** en aval. Dhh est particulièrement important pour le développement des nerfs périphériques et la différenciation gonadique, en coordonnant la maturation de la lignée des cellules de Schwann et la fonction des cellules somatiques testiculaires. Une expression altérée de **DHH** ou une activité anormale de la voie a été associée à des troubles du développement sexuel et à des phénotypes liés aux neuropathies périphériques, et Dhh est fréquemment étudié comme un régulateur dépendant du contexte des programmes de signalisation du développement. En tant que nœud de voie dépendant d’un ligand, Dhh offre un levier pratique pour disséquer la communication paracrine, les gradients de morphogènes et les réponses transcriptionnelles dans des systèmes modèles de cellules souches, d’organoïdes et de développement.

Dhh Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DHH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dhh Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DHH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DHH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dhh. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DHH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dhh au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dhh dans les cellules tumorales présentant une expression de DHH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.