DEC-205 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417220

概要

LY75は、マンノース受容体ファミリーに属する多レクチン型エンドサイトーシス受容体であるDEC-205（CD205）をコードしており、樹状細胞やその他の抗原提示細胞で高発現しています。DEC-205は、タンパク質抗原を高効率に取り込み、エンドソーム／リソソーム区画へと輸送することで、MHCクラスIIによる提示を支えるほか、条件によってはCD8+ T細胞のプライミングに必要なクロスプレゼンテーションも促進します。抗原の捕捉・処理、ならびに免疫寛容と免疫活性化の制御に関与することから、LY75は樹状細胞の成熟プログラムや適応免疫の偏り（免疫極性化）を解析するためにしばしば用いられます。DEC-205の発現や細胞内輸送の変化は、炎症性疾患や自己免疫の状況と関連づけられており、腫瘍免疫学の分野でも、抗原提示状態のマーカーおよび機能的メディエーターとして研究されています。

DEC-205 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLY75遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LY75内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LY75のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DEC-205タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DEC-205シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LY75欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DEC-205の機能に不可欠なLY75エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LY75ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DEC-205 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDEC-205 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LY75遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DEC-205 HDRプラスミド（h）および DEC-205 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLY75ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLY75標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。