DDX41 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402088-ACT

DDX41 codifica uma helicase do tipo DEAD-box que atua como sensor de ácidos nucleicos e fator regulador na sinalização imune inata. Participa da detecção de DNA citosólico e modula respostas de interferon a jusante dependentes de STING/TBK1, conectando o reconhecimento de ácidos nucleicos a programas transcricionais que moldam a inflamação. A DDX41 também contribui para o processamento de RNA e para a dinâmica de complexos ribonucleoproteicos, sustentando um controle amplo da expressão gênica e da homeostase celular. Alterações genéticas ou desregulação de DDX41 têm sido associadas à biologia de doenças hematológicas, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de sinalização imune, metabolismo de RNA e vias associadas a tumores.

DDX41 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DDX41 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDX41 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DDX41 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DDX41, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDX41. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DDX41 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDX41 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDX41 em células tumorais com expressão de DDX41 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.