Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX32 (m): sc-430371

Présentation

Dhx32 code la protéine murine DDX32, une hélicase à ARN putative dépendante de l’ATP de la famille DEAD-box, impliquée dans le remodelage, alimenté par l’ATP, des structures secondaires de l’ARN et des complexes ribonucléoprotéiques. Les protéines de cette classe régulent couramment des processus fondamentaux du métabolisme de l’ARN, notamment l’épissage des pré-ARNm, le transport de l’ARN, la biogenèse des ribosomes et la traduction, reliant ainsi l’activité de DDX32 au contrôle des programmes d’expression génique. Une altération de la fonction des hélicases à ARN peut perturber la régulation du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses transcriptionnelles adaptatives au stress, faisant de Dhx32 un locus utile pour étudier les voies de traitement de l’ARN dans le développement et des phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies. Dans les systèmes murins, l’étude de Dhx32 soutient des travaux mécanistiques reliant le métabolisme de l’ARN aux réseaux de signalisation et aux relations génotype–phénotype.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX32 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dhx32 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dhx32, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dhx32 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDX32.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dhx32 pour l'étude de la signalisation de DDX32, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dhx32 essentiels à la fonction de DDX32
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dhx32 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDX32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DDX32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dhx32. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDX32 plasmide HDR (m) et le DDX32 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dhx32 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dhx32 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.