Plasmide CRISPR d'Activation (h) DDX27: sc-409574-ACT

DDX27 code une hélicase ARN nucléolaire de type DEAD-box qui participe au traitement du pré-ARNr et à la biogenèse des ribosomes, en favorisant l’assemblage efficace des grandes sous-unités ribosomiques et la capacité globale de traduction. En remodelant les complexes ARN–protéines dans le nucléole, DDX27 contribue à la régulation des programmes de croissance et de prolifération cellulaires qui dépendent d’une synthèse protéique strictement contrôlée. La perturbation de la production ribosomique et de l’homéostasie nucléolaire est liée à des signaux de stress cellulaire et à une différenciation altérée, ce qui fait de DDX27 une cible pertinente pour l’étude des ribosomopathies et du remodelage de la traduction associé au cancer. Une activité aberrante de DDX27 a été associée à des phénotypes prolifératifs ainsi qu’à des défauts de processus myogéniques et développementaux dans des systèmes modèles, ce qui appuie son utilisation comme nœud mécanistique dans la recherche sur le métabolisme de l’ARN.

DDX27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DDX27 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DDX27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DDX27 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DDX27, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DDX27. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DDX27 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DDX27 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DDX27 dans les cellules tumorales présentant une expression de DDX27 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.