DDX27 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409574-ACT

DDX27は、核小体に局在するDEAD-box型RNAヘリカーゼをコードしており、pre-rRNA（前駆体rRNA）のプロセシングおよびリボソーム生合成に関与して、大リボソームサブユニットの効率的な組み立てと全体的な翻訳能力を支えます。核小体においてRNA-タンパク質複合体を再構成することで、DDX27は、厳密に制御されたタンパク質合成に依存する細胞成長・増殖プログラムの調節に寄与します。リボソーム産生と核小体恒常性の破綻は、細胞ストレスシグナル伝達や分化の変化と関連しているため、DDX27はリボソモパチーや、がんに伴う翻訳制御の再配線を研究する上で重要です。モデル系では、DDX27活性の異常が増殖性表現型や筋形成・発生過程の欠陥と関連づけられており、RNA代謝研究における機構的な要所としての有用性が示されています。

DDX27 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDX27の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDX27 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDX27 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDX27転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDX27の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDX27遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDX27依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDX27発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDX27経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。