Plasmide Double Nickase (h) DDB2: sc-401686-NIC

DDB2 code un facteur de reconnaissance des lésions de l’ADN qui s’associe à DDB1 pour former le complexe UV-DDB, un capteur clé des photolésions induites par les UV qui initie la réparation par excision de nucléotides à l’échelle du génome (GG-NER). Grâce à son couplage à la machinerie de ligase E3 d’ubiquitination CUL4A–RBX1, DDB2 favorise la vérification des lésions et le remodelage de la chromatine en ubiquitinant des substrats associés à la réparation, facilitant ainsi le recrutement des composants NER en aval. L’activité de DDB2 s’articule avec le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et les voies de stabilité du génome, reliant une reconnaissance défectueuse des dommages à une augmentation de la charge mutationnelle. Une expression ou une fonction altérée de DDB2 a été associée à des phénotypes de sensibilité aux UV et a été étudiée dans le contexte de la carcinogenèse et des troubles liés à la réparation de l’ADN.

DDB2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.