Plasmide Double Nickase (m) Dab2: sc-419936-NIC

Disabled homolog 2 (Dab2) code une protéine adaptatrice de l’endocytose qui relie les récepteurs de cargaison à la machinerie d’internalisation médiée par la clathrine, via des interactions avec la clathrine, AP-2 et des phospholipides. Dans les cellules de souris, DAB2 participe au trafic des récepteurs et à l’atténuation des signaux, influençant des voies telles que TGF-β et Wnt/β-caténine en modulant la disponibilité des récepteurs et l’intensité de la signalisation en aval. Elle contribue également à la polarité épithéliale, à l’adhésion cellulaire et à l’organisation du cytosquelette, des processus centraux pour l’organisation du développement et l’homéostasie tissulaire. Une expression ou une fonction dérégulée de DAB2 a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des phénotypes de différenciation et de migration altérés, pertinents pour la biologie du cancer ainsi que pour le remodelage fibrotique ou inflammatoire.

Dab2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dab2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dab2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dab2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dab2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.