D2DR/Dopamine D2 Receptor Double Nickaseプラスミド (m): sc-420053-NIC

Drd2 はドーパミンD2受容体（D2DR）をコードする遺伝子であり、Gi/o共役型のGPCRとしてアデニリルシクラーゼを抑制し、cAMP/PKAシグナルを低下させるとともに、イオンチャネル活性を調節して神経細胞の興奮性やシナプス伝達を形作ります。D2DRは線条体の中型有棘ニューロンで高発現しており、ドーパミン作動性のトーンとグルタミン酸作動性入力を統合して、基底核回路、運動制御、動機づけ、報酬学習に影響を与えます。受容体シグナルはMAPK/ERK経路やβアレスチン依存性カスケードなどを介して伝達され、神経伝達物質の動態を遺伝子発現プログラムや可塑性に結び付けます。DRD2の機能や発現の変化は、ドーパミン調節異常、抗精神病薬の薬理、行動の回路レベル機構の研究など、神経精神疾患および神経変性疾患に関する研究文脈で関連づけられています。

D2DR/Dopamine D2 Receptor ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Drd2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Drd2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Drd2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Drd2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。