Cytokeratin 15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401869-ACT

KRT15はサイトケラチン15をコードしており、これは基底上皮区画に豊富に存在するI型中間径フィラメントタンパク質で、ケラチノサイトの前駆細胞／幹細胞様状態のマーカーとしてしばしば用いられます。サイトケラチン15は、ケラチンフィラメントの集合および分化・創傷修復プログラムとのクロストークを介して、細胞骨格の完全性、細胞間接着の動態、ならびに上皮のストレス応答に寄与します。その発現は上皮の恒常性維持とリモデリングに関連しており、皮膚やその他の重層上皮における分化状態の変化との関連が報告されています。KRT15の発現パターンの破綻は、上皮の過増殖、腫瘍細胞の可塑性、毛包生物学といった文脈で研究されており、系譜決定や組織再生のメカニズム研究における有用性を支持しています。

Cytokeratin 15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KRT15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cytokeratin 15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KRT15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKRT15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cytokeratin 15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKRT15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCytokeratin 15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKRT15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCytokeratin 15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。