Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 14: sc-400362-NIC

KRT14 code la cytokératine 14, une protéine de filament intermédiaire de type I qui forme un hétérodimère avec la kératine 5 pour constituer le réseau de kératines basales dans les épithéliums stratifiés. Ce système filamentaire assure la résistance mécanique, organise les complexes d'adhérence des desmosomes et des hémidesmosomes, et influence la polarité, la migration et les réponses au stress des kératinocytes au cours de l'homéostasie épidermique et de la réparation des plaies. KRT14 est un marqueur canonique des kératinocytes basaux et est fréquemment utilisé pour étudier les programmes de différenciation épithéliale et le remodelage du cytosquelette. Une expression altérée de KRT14 ou des variants pathogènes sont associés à des troubles de fragilité épidermique et sont exploités comme lectures moléculaires dans des modèles de dysfonctionnement de la barrière cutanée et de pathobiologie des épithéliums malpighiens.

Cytokeratin 14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT14.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.