Cyp4f15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430669-ACT

Cyp4f15 codifica uma monooxigenase de citocromo P450 da família 4F em camundongos, que catalisa o metabolismo oxidativo de lipídios endógenos, incluindo a hidroxilação de ácidos graxos e eicosanoides que modulam a sinalização inflamatória e a homeostase lipídica. Como enzima associada ao retículo endoplasmático (RE), o Cyp4f15 contribui para redes de biotransformação de xenobióticos e lipídios que se conectam ao equilíbrio redox, à remodelação de lipídios de membrana e a vias subsequentes de modulação imunológica. A regulação alterada da oxidação mediada por CYP4F pode influenciar as respostas teciduais ao estresse metabólico e a estímulos inflamatórios, tornando o Cyp4f15 um ponto útil para estudar o turnover de mediadores lipídicos no fígado e em contextos relevantes ao sistema imune. Esses processos são frequentemente explorados em modelos de desregulação metabólica e fenótipos relacionados à inflamação, sem implicar resultados terapêuticos.

Cyp4f15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cyp4f15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cyp4f15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cyp4f15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cyp4f15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cyp4f15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cyp4f15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cyp4f15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cyp4f15 em células tumorais com expressão de Cyp4f15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.