CYP4A10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419927-ACT

O gene Cyp4a10 do camundongo codifica a enzima do citocromo P450 CYP4A10, uma ω-hidroxilase microssomal de ácidos graxos que catalisa o metabolismo de ácidos graxos de cadeia média e longa, incluindo a conversão do ácido araquidônico em eicosanoides bioativos, como o 20-HETE. Por meio dessas reações, a CYP4A10 contribui para a homeostase lipídica e o equilíbrio redox e pode influenciar redes de sinalização ligadas à regulação dos receptores ativados por proliferadores de peroxissomos (PPAR), ao transporte tubular renal e ao tônus vascular. Alterações na expressão ou na atividade de Cyp4a10 têm sido associadas a perfis desregulados de eicosanoides e a efeitos downstream sobre o controle da pressão arterial, a fisiologia renal e as respostas inflamatórias. Como resultado, esse gene é frequentemente estudado em modelos de estresse metabólico e em vias que conectam a oxidação lipídica a fenótipos cardiorrenais.

CYP4A10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cyp4a10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP4A10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cyp4a10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cyp4a10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP4A10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cyp4a10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP4A10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP4A10 em células tumorais com expressão de Cyp4a10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.