CYP19 Plasmide Double Nickase (h): sc-400604-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP19 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP19 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP19 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP19A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP19 Antibody (E-9): sc-374176
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP19 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400604-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP19 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400604-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP19A1 codifica l’aromatasi (CYP19), un enzima microsomiale del citocromo P450 che catalizza la fase terminale della biosintesi degli estrogeni convertendo gli androgeni in estrogeni. Questa attività è centrale nel metabolismo degli ormoni steroidei e nella segnalazione endocrina, plasmando i programmi trascrizionali attraverso le vie del recettore degli estrogeni e influenzando l’omeostasi dello sviluppo e quella specifica dei tessuti. L’espressione di CYP19A1 è strettamente regolata nei contesti gonadico, adiposo, osseo e cerebrale, collegando la produzione locale di estrogeni alla proliferazione e differenziazione cellulare e alla regolazione metabolica. Un’attività dell’aromatasi deregolata è stata associata a fisiopatologie ormone-dipendenti, tra cui alterazioni dell’equilibrio estrogeni/androgeni e una segnalazione aberrante nella biologia riproduttiva e mammaria.
CYP19 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP19A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP19A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP19A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP19A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.