Plasmide Double Nickase (h) CYP19: sc-400604-NIC

CYP19A1 code l'aromatase (CYP19), une enzyme microsomale du cytochrome P450 qui catalyse l'étape terminale de la biosynthèse des œstrogènes en convertissant les androgènes en œstrogènes. Cette activité est centrale dans le métabolisme des hormones stéroïdiennes et la signalisation endocrine, en modulant des programmes transcriptionnels via les voies du récepteur des œstrogènes et en influençant le développement ainsi que l'homéostasie spécifique des tissus. L'expression de CYP19A1 est étroitement régulée dans les gonades, le tissu adipeux, l'os et le cerveau, reliant la production locale d'œstrogènes à la prolifération cellulaire, à la différenciation et à la régulation métabolique. Une activité aromatase dérégulée a été associée à des physiopathologies hormono-dépendantes, notamment un déséquilibre œstrogènes/androgènes et une signalisation aberrante en biologie de la reproduction et du sein.

CYP19 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP19A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP19A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP19A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP19A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.