Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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cyclin T1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400623-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cyclin T1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cyclin T1 Double-Nickase-Plasmid (h) und cyclin T1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CCNT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cyclin T1: sc-271348
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cyclin T1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400623-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cyclin T1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400623-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNT1 kodiert Cyclin T1, eine regulatorische Untereinheit des P-TEFb-Komplexes, der mit CDK9 zusammenwirkt, um die C-terminale Domäne der RNA-Polymerase II zu phosphorylieren und die Transkriptionselongation zu fördern. Durch die Kontrolle der Pausenfreisetzung beeinflusst Cyclin T1 stimulusabhängige Genexpressionsprogramme, die Zellzyklusprogression und differenzierungsassoziierte Transkriptionsnetzwerke. Die CCNT1-abhängige P-TEFb-Aktivität ist zudem mit der Chromatinregulation und der RNA-Prozessierung verknüpft und verbindet so die Transkriptionsdynamik mit umfassenderen genregulatorischen Schaltkreisen. Eine Fehlregulation der Cyclin-T1/CDK9-Signalgebung wurde mit onkogenen Transkriptionszuständen und anderen Erkrankungen in Zusammenhang gebracht, die durch eine veränderte Transkriptionskontrolle gekennzeichnet sind, was ihren Einsatz in mechanistischen Studien transkriptionsabhängiger Phänotypen unterstützt.
cyclin T1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCNT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCNT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCNT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCNT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.