Plasmide CRISPR d'Activation (h) cyclin C: sc-402308-ACT

Le gène humain **CCNC** code la **cycline C**, une cycline transcriptionnelle qui s’associe à **CDK8** ou **CDK19** au sein du module kinase du **complexe Mediator** afin d’ajuster la transcription dépendante de l’ARN polymérase II. En régulant des programmes géniques sensibles aux stimuli, la cycline C influence la progression du cycle cellulaire, l’adaptation métabolique et la signalisation du stress, notamment les voies qui contrôlent la dynamique mitochondriale et l’apoptose. L’activité de CCNC recoupe les réseaux transcriptionnels **WNT/β-caténine**, **TGF-β** et **NF-κB**, reliant la signalisation du module kinase de Mediator à des processus développementaux et inflammatoires. Un dérèglement de la fonction **CCNC/CDK8–Mediator** a été associé à des états transcriptionnels altérés observés dans le cancer et d’autres maladies caractérisées par une perturbation du contrôle de l’expression génique.

cyclin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCNC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cyclin C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCNC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCNC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cyclin C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCNC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cyclin C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cyclin C dans les cellules tumorales présentant une expression de CCNC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.