CX3CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419886

概要

Cx3cr1は、CX3CL1（フラクタルカイン）に対する7回膜貫通型ケモカイン受容体CX3CR1をコードしており、白血球の接着、走化性、ならびに組織のサーベイランス（監視）を制御します。マウスではCX3CR1は単球／マクロファージ、樹状細胞、ミクログリアに強く発現し、ケモカインGPCRシグナル伝達を細胞骨格リモデリング、インテグリン活性化、炎症性転写プログラムと結び付けます。CX3CR1依存性経路はミクログリアの恒常性維持や神経免疫コミュニケーションを形作り、さらに末梢組織における血管炎症や骨髄系細胞のトラフィッキングにも関与します。そのためCx3cr1は、神経炎症、動脈硬化、慢性炎症性疾患のモデルにおいて、広くマーカーとして、また機能的ハブ（要所）として用いられています。

CX3CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCx3cr1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cx3cr1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cx3cr1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CX3CR1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CX3CR1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cx3cr1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CX3CR1の機能に不可欠なCx3cr1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cx3cr1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CX3CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCX3CR1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cx3cr1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CX3CR1 HDRプラスミド（m）および CX3CR1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCx3cr1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCx3cr1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。