Plasmide CRISPR/Cas9 KO CX3CR1 (m): sc-419886

Présentation

Cx3cr1 code pour CX3CR1, un récepteur de chimiokine à sept domaines transmembranaires de CX3CL1 (fractalkine) qui régule l’adhésion des leucocytes, la chimiotaxie et la surveillance tissulaire. Chez la souris, CX3CR1 est fortement exprimé par les monocytes/macrophages, les cellules dendritiques et la microglie, reliant la signalisation des GPCR de chimiokines au remodelage du cytosquelette, à l’activation des intégrines et à des programmes transcriptionnels inflammatoires. Les voies dépendantes de CX3CR1 façonnent l’homéostasie microgliale et la communication neuro-immunitaire, et sont également impliquées dans l’inflammation vasculaire et le trafic des cellules myéloïdes dans les tissus périphériques. En conséquence, Cx3cr1 est largement utilisé comme marqueur et nœud fonctionnel dans des modèles de neuroinflammation, d’athérosclérose et de troubles inflammatoires chroniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CX3CR1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cx3cr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cx3cr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cx3cr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CX3CR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cx3cr1 pour l'étude de la signalisation de CX3CR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cx3cr1 essentiels à la fonction de CX3CR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cx3cr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CX3CR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CX3CR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cx3cr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CX3CR1 plasmide HDR (m) et le CX3CR1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cx3cr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cx3cr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.