Plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (h): sc-401967

Présentation

CUL4A code la culline-4A, un échafaudage central du complexe ligase E3 d’ubiquitine CRL4, qui coordonne l’ubiquitination et la dégradation protéasomale de protéines gouvernant la réplication de l’ADN, la dynamique de la chromatine et la progression du cycle cellulaire. En s’associant à des protéines adaptatrices telles que DDB1 et à de multiples récepteurs de substrats de type DCAF, CUL-4A régule notamment la réparation par excision de nucléotides, l’autorisation de la réplication et les réponses aux dommages de l’ADN induits par les UV. La perturbation de la protéostasie dépendante de CUL4A peut altérer la stabilité du génome et le contrôle des points de contrôle, reliant une activité CRL4 modifiée à des phénotypes associés au cancer et à d’autres troubles impliquant une réparation de l’ADN défectueuse. En tant que nœud central de la signalisation médiée par l’ubiquitine, CUL-4A est fréquemment étudiée dans des voies qui couplent la régulation de la chromatine au stress de réplication et au contrôle transcriptionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CUL4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CUL4A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CUL4A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CUL-4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CUL4A pour l'étude de la signalisation de CUL-4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CUL4A essentiels à la fonction de CUL-4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CUL4A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CUL-4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CUL-4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CUL4A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CUL-4A plasmide HDR (h) et le CUL-4A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CUL4A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CUL4A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.