CTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419996

概要

Slc25a1はミトコンドリアのクエン酸トランスポーターCTPをコードしており、ミトコンドリア内膜に存在する担体として、リンゴ酸との交換によってクエン酸／イソクエン酸を細胞質へ輸送します。このフラックスはTCA回路と細胞質アセチルCoA産生を結び付け、新規脂肪酸合成、コレステロール生合成、ならびにアセチル化依存的な遺伝子発現制御を支えるとともに、NADPH産生経路を介してレドックスバランスにも影響します。ミトコンドリア—細胞質間の炭素移送を調整することで、CTPは増殖・分化に伴う代謝適応に寄与し、炎症やストレス応答プログラムを調節し得ます。クエン酸輸送の異常は先天性代謝異常やより広範な代謝表現型と関連づけられており、Slc25a1はマウス系でミトコンドリア代謝と脂質恒常性を研究するうえで重要な標的となります。

CTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc25a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc25a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc25a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CTPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CTPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc25a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CTPの機能に不可欠なSlc25a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc25a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc25a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CTP HDRプラスミド（m）および CTP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc25a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc25a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。