Plasmide CRISPR d'Activation (h) CTHRC1: sc-418193-ACT

La CTHRC1 humaine (collagen triple helix repeat containing 1) code une protéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, qui module le remodelage tissulaire, la migration cellulaire et la dynamique de l’adhérence. CTHRC1 a été impliquée dans la régulation de la signalisation TGF-β et des voies Wnt non canoniques/de polarité planaire (PCP), influençant l’organisation du cytosquelette et la motilité directionnelle. Une expression altérée de CTHRC1 est fréquemment étudiée dans le remodelage fibrotique, la réparation des plaies et les programmes stromaux associés aux tumeurs, où le renouvellement de la matrice extracellulaire et les comportements invasifs sont dérégulés. En tant que facteur du microenvironnement, CTHRC1 est utilisée comme marqueur et nœud mécanistique pour explorer la signalisation induite par la matrice, des processus de type transition épithélio-mésenchymateuse et la formation de niches métastatiques.

CTHRC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTHRC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CTHRC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTHRC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTHRC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CTHRC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTHRC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CTHRC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CTHRC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CTHRC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.