CTH CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401134-ACT

ヒトCTH（シスタチオニンγリアーゼ）は、トランススルフレーション経路におけるピリドキサールリン酸依存性酵素で、シスタチオニンをシステインに変換し、グルタチオン生合成と細胞のレドックス恒常性に寄与します。CTHはまた、気体状のシグナル分子である硫化水素（H₂S）を産生し、タンパク質のパースルフィド化や関連するチオール基依存性機構を介して、ミトコンドリアの生体エネルギー代謝、炎症シグナル、血管緊張を調節します。メチオニン／ホモシステイン代謝と抗酸化能を結び付けることで、CTH活性は酸化ストレスや栄養利用可能性に対する応答に影響を与えます。硫黄含有アミノ酸代謝およびH₂Sシグナルの制御異常は、心血管・代謝機能障害、神経生物学、腫瘍細胞の適応と関連付けられており、そのためCTHは経路に焦点を当てた研究に有用な結節点となります。

CTH CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CTHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CTH CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CTH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCTH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CTHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCTH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCTH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCTH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCTH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。