CSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403622

概要

DNAJC5 はシステイン・ストリング・プロテイン（CSP）をコードしており、CSP はパルミトイル化された J ドメイン共シャペロンです。CSP はシナプス小胞に豊富に局在し、シナプス前終末において Hsc70 依存性のタンパク質品質管理を協調的に担います。CSP は、SNARE 装置の構成要素やその他の小胞輸送関連タンパク質を安定化することで、シナプス小胞エキソサイトーシスを効率化し、高頻度活動下でも神経伝達の維持に寄与します。シャペロン介在性プロテオスタシス、膜輸送、シナプス恒常性におけるこれらの役割を通じて、DNAJC5/CSP の機能変化は、シナプス維持の障害を特徴とする疾患における神経変性表現型や神経細胞の脆弱性と関連づけられています。

CSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNAJC5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNAJC5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNAJC5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CSPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CSPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNAJC5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CSPの機能に不可欠なDNAJC5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNAJC5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCSP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNAJC5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CSP HDRプラスミド（h）および CSP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNAJC5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNAJC5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。