Plasmide Double Nickase (h) CRMP-4: sc-403305-NIC

DPYSL3 code la collapsin response mediator protein 4 (CRMP‑4), une phosphoprotéine cytosolique qui relie des signaux de guidage extracellulaires au remodelage du cytosquelette dans les neurones et d’autres cellules polarisées. CRMP‑4 participe à la signalisation sémaphorine/neuropiline‑plexine ainsi qu’à des voies de kinases en aval qui régulent la dynamique des microtubules, l’extension des neurites, l’effondrement du cône de croissance et le guidage axonal. En dehors du système nerveux, DPYSL3 a été impliqué dans des programmes de migration et d’adhérence cellulaires via la coordination de l’organisation du cytosquelette. Des altérations de l’expression et des états de phosphorylation de DPYSL3/CRMP‑4 ont été associées à des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, et ont également été étudiées dans l’invasivité des cellules tumorales et les phénotypes métastatiques comme marqueur, dépendant du contexte, de la motilité cellulaire.

CRMP-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DPYSL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DPYSL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DPYSL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DPYSL3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.