CRM1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400348-NIC

XPO1 codifica a CRM1, um receptor de exportação nuclear dependente de RanGTP que reconhece sinais de exportação nuclear ricos em leucina e medeia o transporte direcional de proteínas e de RNAs selecionados através do complexo do poro nuclear. A exportação dependente de CRM1 controla a localização subcelular de reguladores-chave da transcrição, da progressão do ciclo celular, das respostas ao stresse e da sinalização imunitária inata, integrando-se com a dinâmica do ciclo de Ran e com as vias de transporte nuclear. A atividade desregulada de CRM1 perturba o tráfego núcleo–citoplasma de supressores tumorais e fatores de sinalização, e alterações na função de XPO1/CRM1 têm sido associadas a programas oncogénicos, interações vírus–hospedeiro e mecanismos de doenças neurodegenerativas. Estas características fazem de XPO1 um nó central para o estudo do controlo do transporte nucleocitoplasmático e dos seus efeitos a jusante na expressão génica e na proteostase.

CRM1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus XPO1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de XPO1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função XPO1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com XPO1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.