CRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400770

概要

コルチコトロピン放出ホルモン（CRH）は、視床下部—下垂体—副腎（HPA）軸の中枢的調節因子として、生理的ストレスに対する内分泌・自律神経・行動応答を統合する神経ペプチドCRFをコードする。分泌後、CRFは主にCRHR1/CRHR2を介してシグナルを伝え、Gs—アデニル酸シクラーゼ—cAMP/PKA経路を活性化することで、CREB依存的転写と、ACTH放出などの下流の神経内分泌出力を調節する。CRH/CRF活性は炎症および代謝シグナルとも連関し、脳および末梢組織にわたってサイトカイン産生やエネルギー恒常性を形作る。CRH発現やCRF受容体シグナルの破綻は、ストレス関連の神経精神症状ならびに炎症性・消化管疾患と関連づけられており、ストレス—免疫クロストークの機序研究において重要である。

CRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCRH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CRH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CRHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CRFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CRFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CRH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CRFの機能に不可欠なCRHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CRHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CRH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CRF HDRプラスミド（h）および CRF HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCRHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCRH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。