CRBN Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412142-ACT

O CRBN humano codifica a cereblon, um recetor de substratos do complexo ligase E3 de ubiquitina CUL4–DDB1, que controla a homeostase proteica ao direcionar alvos específicos para ubiquitinação e degradação pelo proteassoma. Por meio da regulação da degradação dependente de ubiquitina, o CRBN influencia programas de transcrição, a progressão do ciclo celular e respostas ao stress celular, conectando-se a vias que moldam a diferenciação e a sinalização imunitária. O CRBN tem sido estudado no contexto da biologia do desenvolvimento e da função neuronal, e a perturbação da sua expressão ou atividade está associada a alterações na proteostase e a fenótipos relevantes para doenças. Como um nó central na regulação do sistema ubiquitina–proteassoma, o CRBN é frequentemente investigado para compreender a seleção de substratos dependente do contexto e as consequências a jusante na sinalização.

CRBN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRBN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRBN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRBN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRBN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRBN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRBN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRBN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRBN em células tumorais com expressão de CRBN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.