Plasmide Double Nickase (h) CPT1-C: sc-402510-NIC

La carnitine palmitoyltransférase 1C (CPT1C) code CPT1-C, une enzyme homologue associée aux mitochondries et particulièrement exprimée dans le cerveau, impliquée dans la régulation de la prise en charge des acides gras à longue chaîne et des processus de détection des lipides, plutôt que dans le flux canonique de la β‑oxydation. CPT1-C est liée à l’homéostasie énergétique neuronale, à la fonction mitochondriale et à des réponses adaptatives à la disponibilité en nutriments, qui recoupent le métabolisme des acides gras et les voies de stress cellulaire. Des modifications de l’expression de CPT1C ont été rapportées dans de multiples contextes tumoraux et dans des modèles de maladies neurologiques, ce qui justifie l’étude de la manière dont le remodelage du métabolisme lipidique et la régulation mitochondriale influencent la survie cellulaire, la signalisation et la différenciation. En conséquence, CPT1-C est fréquemment étudiée pour sa contribution à l’adaptation métabolique, à l’équilibre rédox et à la bioénergétique liée à la croissance dans les cellules humaines.

CPT1-C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPT1C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPT1C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPT1C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPT1C.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.