CPEB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-409367-ACT-2

A CPEB2 humana (cytoplasmic polyadenylation element binding protein 2) é uma proteína ligante de RNA que reconhece elementos de poliadenilação citoplasmática nas regiões 3′ UTR para regular, de modo dependente do contexto, o comprimento da cauda poli(A), a estabilidade do mRNA e a tradução. Ao coordenar o controle pós-transcricional da expressão gênica, a CPEB2 contribui para processos como a progressão do ciclo celular, a reprogramação translacional responsiva ao estresse e a sinalização associada à hipóxia por meio da modulação seletiva de transcritos-alvo. Alterações na expressão ou na atividade da CPEB2 têm sido associadas à desregulação do metabolismo de RNA e são estudadas no contexto da biologia do câncer, da função neuronal e de outras doenças em que o controle translacional está comprometido. A edição gênica de CPEB2 permite a dissecação mecanística de redes regulatórias de RNA, o mapeamento de efeitos translacionais específicos por transcrito e a investigação funcional do controle mediado pela 3′ UTR em modelos de células humanas.

CPEB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CPEB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CPEB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CPEB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CPEB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CPEB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CPEB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CPEB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CPEB2 em células tumorais com expressão de CPEB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.