copine 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406621

Visão geral

CPNE1 codifica a copina 1, uma proteína de ligação a fosfolípidos dependente de cálcio, que contém domínios C2 e um domínio A que favorece o recrutamento para membranas e as interações proteína–proteína em resposta a sinais de Ca²⁺. A copina 1 tem sido implicada na coordenação do tráfego de membranas, da remodelação do citoesqueleto e da transdução de sinais, ao acoplar fluxos de cálcio a interações espacialmente restritas na membrana plasmática e em compartimentos endomembranares. Entre as ligações funcionais descritas incluem-se a modulação de sinalização associada a recetores e de respostas ao stress celular, com efeitos a jusante em programas de proliferação, migração e diferenciação. A desregulação da expressão ou atividade de CPNE1 tem sido associada à biologia tumoral e a outras perturbações nas quais alterações na sinalização do cálcio e na dinâmica de membranas contribuem para fenótipos patogénicos, tornando-o relevante para estudos mecanísticos em modelos de doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO copine 1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CPNE1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CPNE1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CPNE1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína copine 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CPNE1 para a investigação da sinalização de copine 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CPNE1 críticos para a função copine 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CPNE1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo copine 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo copine 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CPNE1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo copine 1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR copine 1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CPNE1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CPNE1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.