Plasmide Double Nickase (h) COL4A4: sc-404186-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL4A4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL4A4 Double Nickase (h) et le plasmide COL4A4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL4A4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL4A4 | sc-404186-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL4A4 | sc-404186-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A4 code la chaîne alpha-4 du collagène de type IV, un composant structural central des membranes basales qui s’assemble en réseaux de collagène IV hétérotrimériques soutenant l’architecture des tissus. Dans le rein, COL4A4 contribue à la membrane basale glomérulaire, en influençant l’intégrité de la barrière de filtration, l’adhérence cellule–matrice et la mécanotransduction via la signalisation matrice extracellulaire–intégrines. La fonction de COL4A4 s’inscrit dans des voies d’organisation de la matrice extracellulaire et de remodelage de la membrane basale qui façonnent la différenciation et la survie des cellules épithéliales et endothéliales. Des altérations génétiques de COL4A4 sont associées à des maladies héréditaires de la membrane basale, notamment le syndrome d’Alport et des néphropathies apparentées, caractérisées par des modifications progressives de la structure glomérulaire.
COL4A4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL4A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL4A4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL4A4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL4A4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.