CNG-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419713
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CNG-1 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してCNG-1ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CNG-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-419713 | 20 µg | $397.00 |
概要
Cnga1は、マウス桿体視細胞における光情報伝達機構（phototransduction）の中核をなす環状ヌクレオチド作動性チャネルCNG-1のαサブユニットをコードする。CNG-1は外節の細胞膜にcGMP作動性カチオンチャネルを形成し、光によって引き起こされるcGMP量の変化をNa⁺/Ca²⁺流入へと結び付けることで、膜電位および下流のシナプス伝達シグナルを形作る。このチャネル機能は、cGMP代謝、Ca²⁺恒常性、ならびに視覚感度を調節する順応機構と相互に関与している。CNGA1依存性シグナルの破綻は、桿体機能障害や網膜変性様の表現型と関連しており、遺伝性網膜疾患の機序研究において重要である。
CNG-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCnga1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cnga1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cnga1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CNG-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、CNG-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cnga1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- CNG-1の機能に不可欠なCnga1エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Cnga1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- CNG-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCNG-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cnga1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
CNG-1 HDRプラスミド（m）および CNG-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCnga1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCnga1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。