CLN5 Plasmide Double Nickase (h): sc-408473-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLN5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CLN5 Double Nickase Plasmid (h) e il CLN5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CLN5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLN5 Antibody (D-8): sc-374672
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLN5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408473-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLN5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408473-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLN5 codifica una glicoproteina lisosomiale solubile coinvolta nel traffico endolisosomiale e nella proteostasi, supportando il corretto funzionamento dei lisosomi e il turnover delle macromolecole cellulari. L’attività di CLN5 è collegata a vie lisosomiali, tra cui il flusso autofagia-lisosoma, il trasporto vescicolare e il mantenimento dell’omeostasi neuronale. Varianti loss-of-function in CLN5 sono associate alla ceroidolipofuscinosi neuronale, caratterizzata da patologia da accumulo lisosomiale e neurodegenerazione progressiva, rendendo CLN5 un bersaglio chiave per lo studio dei meccanismi di disfunzione lisosomiale. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di CLN5 è comunemente utilizzata per indagare la maturazione/processing degli enzimi lisosomiali, lo smistamento del carico e l’accumulo di materiale di deposito.
CLN5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CLN5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CLN5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CLN5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CLN5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.