Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-2B (m): sc-425297

Présentation

Clec1b code le récepteur murin de type lectine C CLEC-2B, une protéine membranaire de type II impliquée dans une signalisation dépendante du ligand à la surface cellulaire. En tant que membre de la famille des récepteurs de type lectine C (C-type lectin-like), CLEC-2B contribue à la régulation de la communication cellulaire immunitaire et vasculaire en modulant l’activation médiée par les récepteurs et les cascades de phosphorylation en aval. Des liens fonctionnels avec des réseaux de signalisation associés aux plaquettes et avec des microenvironnements inflammatoires font de Clec1b une cible pertinente pour l’étude de l’hémostase, des interactions leucocyte–endothélium et du remodelage tissulaire. Une signalisation dérégulée des récepteurs lectiniques est fréquemment étudiée dans le contexte de l’inflammation associée à la thrombose et des pathologies à médiation immunitaire à l’aide de modèles murins mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-2B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Clec1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Clec1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Clec1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLEC-2B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Clec1b pour l'étude de la signalisation de CLEC-2B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Clec1b essentiels à la fonction de CLEC-2B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Clec1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CLEC-2B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CLEC-2B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Clec1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CLEC-2B plasmide HDR (m) et le CLEC-2B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Clec1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Clec1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.