Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP6 (h): sc-406179

Présentation

CHMP6 (charged multivesicular body protein 6) est un composant central de la machinerie ESCRT-III, qui coordonne le remodelage des membranes endosomales et la biogenèse des corps multivésiculaires, permettant le tri des cargos et leur dégradation lysosomale. Grâce à la scission membranaire dépendante d’ESCRT, CHMP6 contribue à réguler la diminution des récepteurs, le trafic lié aux exosomes, ainsi que plus largement la protéostasie et l’homéostasie des voies de signalisation. Des perturbations de la voie ESCRT ont été associées à des défauts de trafic endolysosomal, de cytocinèse, d’autophagie et de bourgeonnement viral, des processus fréquemment altérés dans le cancer et les maladies neurodégénératives. Par conséquent, CHMP6 est couramment étudié pour sa contribution aux phénotypes de trafic vésiculaire, à la dynamique de signalisation des récepteurs et aux réponses au stress liées au dysfonctionnement endosomal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHMP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHMP6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHMP6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHMP6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHMP6 pour l'étude de la signalisation de CHMP6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHMP6 essentiels à la fonction de CHMP6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHMP6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHMP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CHMP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHMP6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHMP6 plasmide HDR (h) et le CHMP6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHMP6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHMP6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.