CHMP4B Double Nickaseプラスミド (h): sc-401802-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CHMP4B Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CHMP4Bダブルニカースプラスミド（h）およびCHMP4Bダブルニカースプラスミド（h2）は、CHMP4Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CHMP4B Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHMP4B Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHMP4B（charged multivesicular body protein 4B）は、エンドソームでの仕分けや多小胞体（multivesicular body：MVB）形成に必要な膜リモデリングを駆動するESCRT-III複合体の中核構成因子です。CHMP4Bは膜上で重合し、VPS4のATPase活性と協調することで、カーゴの隔離、内腔小胞（intraluminal vesicle）の形成、ならびに細胞質分裂におけるアブシジョン（最終切断）段階を支え、受容体のダウンレギュレーションや膜切断を制御する経路と結びついています。CHMP4B依存的なESCRT機能はまた、エンドリソソーム輸送を介して、形質膜修復やオートファジーの一部、リソソーム恒常性にも寄与します。CHMP4Bを含むESCRT-III構成因子の遺伝学的撹乱は、細胞分裂やプロテオスタシスの異常と関連し、神経変性疾患や眼疾患の文脈、さらにはがんに関連するエンドサイトーシス・ネットワークにおけるシグナル変化にも関与すると示唆されています。
CHMP4B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHMP4B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHMP4B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHMP4Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHMP4Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。