Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD8 (m): sc-426734

Présentation

Chd8 code la protéine 8 se liant à l’ADN de type chromodomain hélicase (CHD8), un remodelageur de la chromatine dépendant de l’ATP qui régule le positionnement des nucléosomes et les programmes transcriptionnels au cours du développement. CHD8 influence l’accessibilité des enhancers et des promoteurs, reliant l’architecture de la chromatine au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation neuronale et aux sorties transcriptionnelles associées à la voie Wnt/β-caténine. Dans les modèles murins, Chd8 est largement utilisé pour étudier les mécanismes du neurodéveloppement et les réseaux de régulation génique, car des altérations du dosage de CHD8 ont été associées à la biologie des troubles du spectre de l’autisme dans des études génétiques et fonctionnelles. Ces propriétés font de CHD8 un nœud central pour étudier le contrôle, médié par la chromatine, de la spécification des lignages et de l’homéostasie transcriptionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chd8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chd8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chd8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHD8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chd8 pour l'étude de la signalisation de CHD8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chd8 essentiels à la fonction de CHD8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chd8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHD8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CHD8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chd8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHD8 plasmide HDR (m) et le CHD8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chd8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chd8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.