CHCHD3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425804

Visão geral

Chchd3 codifica a CHCHD3 (também conhecida como Mic19), um componente central do sistema organizador de sítios de contato mitocondriais e de cristas (MICOS), que mantém a arquitetura da membrana interna mitocondrial e a integridade das junções das cristas. Ao atuar como plataforma para complexos proteicos nas junções das cristas e ao coordenar-se com as maquinarias de dinâmica mitocondrial e de importação de proteínas, a CHCHD3 sustenta a eficiência da fosforilação oxidativa, a organização da cadeia respiratória e o controle de qualidade mitocondrial. A disfunção de componentes do MICOS, incluindo CHCHD3, está associada a alterações na bioenergética, aumento de espécies reativas de oxigênio e efeitos a jusante sobre apoptose, mitofagia e sinalização de estresse celular. Esses processos são frequentemente investigados em modelos de neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e adaptação metabólica de células cancerosas, nos quais a ultraestrutura mitocondrial e a respiração são fenótipos centrais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CHCHD3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Chchd3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Chchd3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Chchd3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CHCHD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Chchd3 para a investigação da sinalização de CHCHD3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Chchd3 críticos para a função CHCHD3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Chchd3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CHCHD3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CHCHD3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Chchd3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CHCHD3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CHCHD3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Chchd3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Chchd3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.