Cdx2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419618-LAC

Il gene murino Cdx2 (caudal type homeobox 2) codifica un fattore di trascrizione homeobox che coordina la patterning antero-posteriore e la specificazione delle linee epiteliali durante lo sviluppo precoce. CDX2 regola reti geniche che controllano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione, con ruoli di primo piano nella maturazione dell’epitelio intestinale e nel mantenimento dei programmi associati alla barriera. In qualità di regolatore trascrizionale, integra segnali dello sviluppo e modella stati trascrizionali dipendenti dalla cromatina che influenzano l’identità tissutale. L’espressione deregolata di CDX2 e le alterazioni dei programmi trascrizionali a valle sono ampiamente utilizzate come readout meccanicistici negli studi di biologia gastrointestinale, plasticità epiteliale e stati di differenziazione associati al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale Cdx2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cdx2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Cdx2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cdx2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Cdx2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cdx2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.