Plasmide Double Nickase (h) CDw75/ST6GAL1: sc-402881-NIC

ST6GAL1 (CDw75) code la β-galactoside α-2,6-sialyltransférase 1, une enzyme localisée dans l’appareil de Golgi qui catalyse la sialylation terminale α2,6 des glycannes N-liés sur des glycoprotéines membranaires et sécrétées. Cette modification façonne le repliement des glycoprotéines, la stabilité des récepteurs et la reconnaissance des ligands, influençant les interactions cellule–cellule, la modulation immunitaire et la transduction du signal via des événements de liaison dépendants des glycannes modifiés. L’activité de ST6GAL1 contribue à la régulation des glycomes de surface des lymphocytes B et des cellules épithéliales et affecte des processus tels que l’adhésion, la migration et l’apoptose. Une expression dérégulée de ST6GAL1 et des profils de sialylation α2,6 altérés ont été associés à des modifications du comportement des cellules tumorales, à l’inflammation et à la susceptibilité aux infections, ce qui en fait un nœud clé pour la glycobiologie et la recherche sur les mécanismes des maladies.

CDw75/ST6GAL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ST6GAL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ST6GAL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ST6GAL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ST6GAL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.