Plasmide Double Nickase (h) Cdt1: sc-401014-NIC

Le gène humain **CDT1** code Cdt1, un facteur essentiel d’autorisation de la réplication qui charge l’hélicase MCM2–7 sur la chromatine à la fin de la mitose et en phase G1 afin d’établir les complexes de pré-réplication et de garantir une réplication de l’ADN une seule fois par cycle cellulaire. L’activité de Cdt1 est étroitement contrôlée par la phosphorylation dépendante des CDK et par une protéolyse médiée par l’ubiquitine via les voies SCF et CRL4–DDB1–Cdt2, intégrant l’autorisation des origines de réplication aux signaux des points de contrôle et au contexte chromatinien. Une expression déréglée de **CDT1** ou sa stabilisation favorise la re-réplication, le stress de réplication et les réponses aux dommages de l’ADN, reliant Cdt1 à des phénotypes d’instabilité génomique étudiés en biologie du cancer et dans d’autres troubles prolifératifs. En tant que nœud de contrôle de l’entrée en phase S, Cdt1 est fréquemment étudiée avec la géminine (GMNN), des composants de l’ORC et les voies ATR/CHK1 afin d’analyser la synchronisation de la réplication et la progression du cycle cellulaire.

Cdt1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.