Cdt1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401014-NIC

ヒトCDT1は、複製ライセンシング因子として必須のCdt1をコードしており、後期有糸分裂からG1期にかけてMCM2–7ヘリカーゼをクロマチンへロードすることで、複製前複合体（pre-replication complex）を形成し、DNA複製が細胞周期あたり1回だけ起こることを保証します。Cdt1の活性は、CDK依存的リン酸化と、SCF経路およびCRL4–DDB1–Cdt2経路を介したユビキチン依存的分解によって厳密に制御されており、複製起点のライセンシングをチェックポイントシグナルやクロマチンの状態と統合しています。CDT1の発現異常や安定化は再複製、複製ストレス、DNA損傷応答を促進し、Cdt1ががん生物学やその他の増殖性疾患で研究されるゲノム不安定性の表現型に関与することを示しています。S期移行制御の結節点として、Cdt1は複製タイミングや細胞周期進行を解析する目的で、しばしばgeminin（GMNN）、ORC構成要素、ATR/CHK1経路などと併せて検討されます。

Cdt1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。