Cdt1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401014-ACT

ヒトCDT1は、DNA複製のライセンシング因子であるCdt1をコードしており、後期有糸分裂からG1期にかけて複製起点にMCM2–7ヘリカーゼをロードすることで、S期への適時な移行を保証する。Cdt1の活性は、CDK依存的リン酸化、ジェミニン結合、ならびにCRL4^Cdt2およびSCF^Skp2経路を介したユビキチン依存的分解によって厳密に制御され、再複製を防いでゲノム安定性を維持している。CDT1の制御異常は、複製ストレス、異常な複製起点の発火、DNA損傷シグナル伝達を引き起こし得て、これらの過程はがんやその他の増殖性疾患における染色体不安定性としばしば関連する。起点ライセンシングネットワークの中核構成要素として、Cdt1は細胞周期制御、チェックポイント応答、複製に共役したDNA修復の研究で広く解析されている。

Cdt1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdt1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdt1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdt1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdt1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。