Plasmide Double Nickase (h) Cdc34: sc-403783-NIC

Le gène humain **CDC34** code **Cdc34**, une enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine qui s’associe aux ligases E3 de type **SCF** (SKP1–CUL1–F-box) pour assembler des chaînes de polyubiquitine liées en **K48** et favoriser la dégradation protéasomale de régulateurs clés du cycle cellulaire et de la réplication de l’ADN. En contrôlant l’ubiquitination de substrats tels que les inhibiteurs de CDK et les facteurs impliqués dans l’octroi de la licence de réplication, Cdc34 contribue à coordonner la progression **G1/S**, la signalisation des points de contrôle et la stabilité du génome. Une activité ou une expression dérégulée de **CDC34** a été associée à une protéostase altérée et à des programmes de prolifération aberrants observés dans de multiples contextes liés au cancer, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les dépendances de la voie de l’ubiquitine. **CDC34** est également utilisé pour explorer le fonctionnement des ligases culline‑RING, la dynamique de la signalisation par l’ubiquitine et les réponses adaptatives au stress protéotoxique ou au stress réplicatif.

Cdc34 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDC34 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDC34. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDC34. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDC34.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.