Cdc27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400789-ACT

CDC27 codifica a Cdc27, uma subunidade central do complexo promotor da anáfase/ciclossoma (APC/C), uma ligase E3 de ubiquitina que promove a proteólise ordenada de reguladores mitóticos-chave para garantir a segregação fiel dos cromossomos e as transições do ciclo celular. Por meio da ubiquitinação dependente do APC/C de substratos como securina e ciclinas, a Cdc27 ajuda a coordenar a sinalização do checkpoint do fuso, a saída da mitose e a manutenção da estabilidade genômica. A desregulação de componentes do APC/C e do controle de checkpoints está associada à instabilidade cromossômica e a fenótipos proliferativos observados em múltiplos contextos tumorais, tornando o CDC27 um nó útil para estudar o controle mitótico e a dinâmica do sistema ubiquitina–proteassoma. Assim, o CDC27 humano é amplamente utilizado em investigações sobre o timing da divisão celular, a fidelidade dos checkpoints e vias que conectam a proteostase à manutenção do genoma.

Cdc27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdc27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdc27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdc27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdc27 em células tumorais com expressão de CDC27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.