Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc20B (h): sc-406774

Présentation

CDC20B (cell division cycle 20B) code une protéine de type Cdc20 dont on prédit qu’elle participe à la régulation associée au cycle cellulaire, avec une similarité de séquence avec des coactivateurs de l’APC/C qui coordonnent la protéolyse médiée par l’ubiquitine au cours de la progression mitotique. Bien que moins bien caractérisée que CDC20, l’expression de CDC20B et son contexte génomique ont été associés à des programmes prolifératifs et à des états de différenciation dans certains tissus, suggérant des rôles dans le contrôle de transitions couplant le rythme du cycle cellulaire au remodelage cellulaire. La perturbation de CDC20B pourrait donc influencer des voies impliquées dans le contrôle des points de contrôle, la stabilité chromosomique et le renouvellement régulé des protéines. Ces processus sont fréquemment altérés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par une prolifération dérégulée, ce qui fait de CDC20B une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle de la croissance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc20B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDC20B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDC20B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDC20B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdc20B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDC20B pour l'étude de la signalisation de Cdc20B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDC20B essentiels à la fonction de Cdc20B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDC20B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdc20B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cdc20B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDC20B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdc20B plasmide HDR (h) et le Cdc20B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDC20B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDC20B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.