Cdc20B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406774

概要

CDC20B（cell division cycle 20B）は、細胞周期に関連した制御に関与すると予測されるCdc20様タンパク質をコードしており、有糸分裂の進行中にユビキチン依存的なタンパク質分解を協調するAPC/C（アナフェーズ促進複合体／サイクロソーム）共活性化因子と配列相同性を示します。CDC20ほど詳細には解析されていないものの、CDC20Bの発現およびゲノム上の位置づけは、特定の組織における増殖プログラムや分化状態と関連づけられており、細胞周期のタイミングと細胞リモデリングを結び付ける移行を制御する役割が示唆されます。したがってCDC20Bの撹乱は、チェックポイント制御、染色体安定性、制御されたタンパク質ターンオーバーを司る経路に影響を及ぼす可能性があります。これらの過程は、がんや増殖制御の破綻を伴う他の疾患でしばしば変化しているため、CDC20Bは増殖制御の分子機構を解明する研究に有用な標的となります。

Cdc20B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDC20B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDC20B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDC20Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdc20Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdc20Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDC20B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdc20Bの機能に不可欠なCDC20Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDC20Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdc20B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCdc20B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDC20B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdc20B HDRプラスミド（h）および Cdc20B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDC20Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDC20B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。