Cdc20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400583

概要

CDC20は、ユビキチン依存的に主要な有糸分裂制御因子を分解させることで、中期から後期への移行を制御するアナフェース促進複合体／サイクロソーム（APC/C）の必須共活性化因子であるCdc20をコードする。その活性は、MAD2やBUBR1などのタンパク質との阻害性複合体を介して紡錘体形成チェックポイントにより制御され、正確な染色体分配と適切なタイミングでの有糸分裂終結を担保している。CDC20の制御異常はチェックポイントの忠実性を損ない、染色体不安定性や異数性を引き起こし、がん生物学における増殖性表現型としばしば関連づけられる。細胞周期制御の中枢ノードとして、Cdc20はAPC/Cシグナル伝達、ユビキチン―プロテアソーム動態、有糸分裂チェックポイント制御に関わる経路で広く研究されている。

Cdc20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDC20遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDC20内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDC20のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cdc20タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cdc20シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDC20欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cdc20の機能に不可欠なCDC20エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDC20ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cdc20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCdc20 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDC20遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cdc20 HDRプラスミド（h）および Cdc20 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDC20ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDC20標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。