Cdc2 p34 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400181-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cdc2 p34O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Cdc2 p34 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Cdc2 p34 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CDK1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Cdc2 p34 Anticorpo (17): sc-54
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cdc2 p34 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400181-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc2 p34 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400181-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK1 codifica a quinase serina/treonina Cdc2 p34, a subunidade catalítica central do fator promotor da fase M, que impulsiona a transição G2/M e a progressão mitótica. A atividade de CDK1 é coordenada pela ligação a ciclinas, pela fosforilação ativadora pela quinase ativadora de CDKs e pelo controlo inibitório por WEE1/MYT1 e pelas fosfatases CDC25, ligando a sinalização de checkpoints à segregação ordenada dos cromossomas. Como nó central nos circuitos do ciclo celular, CDK1 cruza-se com as vias de resposta a danos no ADN e de stress de replicação para regular a entrada em mitose, a montagem do fuso e a citocinese. A desregulação da sinalização de CDK1 e o controlo alterado dos checkpoints são frequentemente observados em perturbações proliferativas e fornecem uma base mecanística para estudar a instabilidade genómica e a dependência do ciclo celular em modelos de células humanas.
Cdc2 p34 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CDK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CDK1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CDK1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CDK1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.