Plasmide Double Nickase (h) Cdc2 p34: sc-400181-NIC

CDK1 code la kinase sérine/thréonine Cdc2 p34, sous-unité catalytique centrale du facteur promoteur de la phase M, qui pilote la transition G2/M et la progression mitotique. L'activité de CDK1 est coordonnée par la liaison aux cyclines, la phosphorylation activatrice par la kinase d'activation des CDK, et un contrôle inhibiteur assuré par WEE1/MYT1 et les phosphatases CDC25, reliant la signalisation des checkpoints à une ségrégation ordonnée des chromosomes. En tant que nœud central des circuits du cycle cellulaire, CDK1 s'articule avec les voies de réponse aux dommages de l'ADN et de stress de réplication pour réguler l'entrée en mitose, l'assemblage du fuseau et la cytocinèse. Une dérégulation de la signalisation de CDK1 et une altération du contrôle des checkpoints sont fréquemment observées dans les troubles prolifératifs et offrent une base mécanistique pour étudier l'instabilité génomique et la dépendance au cycle cellulaire dans des modèles cellulaires humains.

Cdc2 p34 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.