Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD52: sc-403151-ACT

CD52 code une petite glycoprotéine ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), exprimée à forte densité à la surface de nombreuses cellules hématopoïétiques, notamment les lymphocytes et les monocytes. Grâce à son ancrage membranaire et à sa localisation dans des microdomaines lipidiques, CD52 participe aux interactions cellule–cellule et peut influencer les états d’activation des cellules immunitaires ainsi que les processus de signalisation liés à la fonction des leucocytes. L’expression de CD52 est largement utilisée pour définir des sous-populations de cellules immunitaires et pour étudier les mécanismes qui régissent l’homéostasie immunitaire et les réponses inflammatoires. Des profils d’expression de CD52 altérés ont été rapportés dans diverses maladies à médiation immunitaire et hémopathies malignes, ce qui confirme l’intérêt de CD52 pour l’étude de la régulation immunitaire dans des contextes pathologiques.

CD52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD52 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD52 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD52, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD52. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD52 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD52 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD52 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD52 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.