CD5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402309-ACT

CD5は、主にTリンパ球およびB細胞の一部に発現する、スカベンジャー受容体システインリッチ（SRCR）ファミリーに属する細胞表面糖タンパク質をコードしており、抗原受容体シグナル伝達の重要な調節因子として機能します。T細胞受容体（TCR）複合体と会合し、CD72などのリガンドと相互作用することで、CD5は活性化の閾値、カルシウムフラックス、サイトカイン産生、さらには免疫恒常性を形作る下流のMAPKおよびNF-κBシグナル出力を調整します。CD5の発現量やシグナル伝達の変化は、リンパ球の活性化や分化の破綻と関連しており、自己免疫性炎症や、異常なB/T細胞表現型を特徴とする血液悪性腫瘍との関係が示されています。バイオマーカーであると同時に機能的調節因子として、CD5は免疫シナプスのダイナミクス、免疫寛容、ならびに系統特異的なシグナル伝達プログラムの研究に頻繁に用いられています。

CD5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。