CD45RC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400245-ACT

PTPRC codifica o CD45RC, uma isoforma do antigénio comum dos leucócitos (CD45), uma fosfatase tirosina de proteínas do tipo recetor que regula os limiares de sinalização dos recetores de antigénio em células hematopoéticas. Ao desfosforilar quinases-chave da família Src e ao modular a atividade a jusante das vias MAPK, PI3K/AKT e JAK/STAT, o CD45RC influencia a ativação de células T, as respostas a citocinas e a homeostase imunitária. O splicing alternativo de PTPRC gera isoformas de CD45 com domínios extracelulares distintos, que moldam a diferenciação dos linfócitos e funções específicas de subpopulações. A desregulação da sinalização do CD45 e do equilíbrio entre isoformas é relevante em estudos de autoimunidade, mecanismos de doença inflamatória e biologia de neoplasias hematológicas, em que alterações na sinalização imunitária contribuem para a patogénese.

CD45 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPRC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD45 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPRC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPRC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD45. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPRC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD45 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD45 em células tumorais com expressão de PTPRC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.