CD42d CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404793-ACT

GP5は血小板糖タンパク質V（CD42d）をコードしており、高せん断条件下で血小板の接着および活性化を制御するGPIb-IX-V受容体複合体の構成要素です。フォン・ヴィレブランド因子との相互作用やトロンビン応答性シグナル伝達を介して、CD42dは一次止血、細胞骨格の再構築、ならびに血栓形成を支えるインテグリン活性化に寄与します。GPIb-IX-V複合体の量や機能の変化は、血小板機能障害の表現型や出血傾向／血栓傾向と関連しており、GP5は血管生物学および凝固の研究において重要なノードとなります。実験系では、GP5発現は巨核球／血小板系譜プログラムや受容体複合体の組み立てのマーカーとしても利用できます。

CD42d CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GP5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD42d CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GP5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGP5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD42dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGP5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD42d依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGP5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD42d経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。